移液器的使用维护和校准（转）,泽恒计量检测（北京）有限公司

移液器

构造和原理

移液器的工作是利用空气置换原理来实现的。活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液与排液。设定好量程后，推动活塞，排出部分空气，利用活塞拉力及大气压吸入液体，再由活塞推力排出液体。所以移液器的气密性好坏格外重要。

>>>> 影响移液准确性和精确性的因素主要有以下3点：

吸头：1. 吸头的质量（吸头的做工和材质，可影响吸头内壁的液体残留和移液准确性。目前，国产的吸头虽然价格低，但质量上尚未达到国际水准，因此推荐使用进口的吸头）；2.吸头与移液器的匹配度（吸头与移液器的匹配度影响了吸头与移液器之间的气密性，因此选择适配的吸头与移液器非常重要。推荐使用同一厂家的移液器与吸头，保证其匹配度）

移液器：移液器通过空气置换原理进行移液，其密封性、弹簧的弹性形变是影响移液的关键因素。因此平时使用移液器时，必须要正确操作、定期维护，才能保证移液器的准确。

操作者：最关键的其实就是操作者本身。养成正确的操作规范，可提高移液的准确性、大大减少移液产生的误差，保证实验结果。

一次移液操作，可分解为装吸头、量程设定、润洗吸头、吸液、排液和吹液、以及退吸头六个步骤

一次移液操作

第一步：装吸头

第二步：量程设定

移液器量程的设定原则：由大到小！

1) 由大量程向小量程调节时：如从600μl调节至400μl，直接调节；

2) 由小量程向大量程调节时：先朝所需量程方向连贯旋转，旋转到达超过所需量程1/3圈处，回调到所需量程处。如从20μl调节至50μl，先调节至60μl，再回旋至50μl。

注：这是因为由小量程向大量程调节时，弹簧的弹性形变在短时间内无法完全回复，需有一个恢复阶段，可以想象一下刚从沙发上起身时，沙发垫恢复原状也是需要一定时间的。

Ø 正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性！

量程范围的选择

选择量程时，需要注意，一般在 10%-100% 量程范围内可以操作，但在 10% 量程操作需要较高的操作技巧。因此建议的最佳量程是35%-100% 量程范围。在此量程范围，对操作技巧依赖更少，并保证移液的准确性和精度。从表中可以看出，当选择的量程范围越小，移液的准确性和重复性就会越差。

Ø 选择合适的吸头量程，可提高1%移液准确性！

第三步：润洗吸头

用同一样品对吸头进行润洗。先吸取样品，然后排回样品池或废液槽。充分吸液排液2-3次。

润洗的作用：

1. 在吸头内形成同质膜，降低吸头对样品的吸附；
2. 有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性。

注意：对于高温/低温样品，由于热胀冷缩带来更大的误差，不建议润洗。

Ø 润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!

第四步：吸液

此步影响移液准确性的因素主要有以下4点：

吸头浸入角度：建议尽量保持垂直，倾斜角度不大于15°。

Ø 正确的移液角度，可提高2.5%移液准确性！

吸头的浸入深度：10μl以下的吸头，浸入深度为1-2mm；10-200μl的吸头，浸入深度为2-3mm；200-2000μl的吸头，浸入深度为3-6mm；2000μl以上的吸头，浸入深度为6-10mm。

Ø 以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%)！

吸头浸入时间：吸液后保持吸头浸入液面最少1秒，然后将吸头平缓移开液面。对吸取大容量样品或者高粘度样品尤为重要。

吸液速度：吸液通常采用一档吸液、二挡排液，在吸液时保持平顺，缓慢松开活塞，控制好吸液速度。过快的吸液速度，会导致形成气柱，使移液不准确；样品液进入套柄，对活塞和密封圈造成损伤；带入气雾，造成样品交叉污染。

Ø 不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降！

第五步：排液和吹液

先将排液按钮按至第一档(排液档)，略作停顿以后，再按至第二档(吹液档)。

常规排液操作：

1. 沿内壁排液(常规)

2. 直接排入液面下:直接排入液面排液时要保持活塞下压再离开液面，否则容易导致倒吸！

3. 在液面上方排液

Ø 正确的排液技术提高1%的移液准确性！

操作一致性

保持一致的移液节奏，使活塞下压的速度和平稳一致。为了达到最好的操作一致性，可选择使用电动移液器，减少人为操作的影响

Ø 操作的一致性可提高1%的移液准确性！

★ 窍门：反向移液模式

适用于高粘度、挥发性的样品，如甘油、乙醇等，提高移液的准确性。同常规移液操作相反的流程，即二挡吸液、一档排液。

移液小结

误差大小	误差范围 %	技术操作
大	1.0%- 5.0%	吸头浸入深度/角度不正确(特别注意微量程移液器) 错误的吸液速度
中	0.5% -1.0%	选择合适的量程吸头浸入深度吸液速度排液技术一致性
小	小于 0.5%	量程设定 (已选合适量程) 吸头浸入角度润洗手温影响

维护和校准

仅10%的移液故障(漏液/明显不准)是显而易见的！但频繁使用带来的系统偏差、密封油脂的自然损耗和错误操作带来的损伤等等，都会对移液产生影响，因此对移液器的日常维护和校准是必不可少的。对于使用者，可以进行一些简单的验证和常规保养，专业的校准和预防性维护可交由供应商。

移液器的放置

1. 在实验间隙，将移液器放置于支架上有利于避免手温影响。

2. 当天用完应调回最大量程后，放置于移液器支架上。这一点在很多实验室都做不到。弹簧长期处于压缩状态，对于弹性形变会造成影响，从而导致移液结果不准。

移液器的日常清洁

外部清洁：日常清洁剂(肥皂液、洗洁精等)擦洗，然后用双蒸水擦净晾干即可。

内部清洁：

1. 下半部分拆卸下来；

2. 塑料部件(套柄等)采用与外部清洁一致的方式即可；

3. 活塞清洁可用双蒸水(或先用异丙醇冲洗再用双蒸水洗净)，晾干即可。(一般活塞的清洁涉及到补充涂抹专用的密封油脂)

Ø 注意：移液器主体密封部分，大多是免维护的，不能轻易拆卸。

移液器密封性检查

绝大部分移液器不准是由于移液器漏气造成的。造成移液器漏气的原因：吸头是否匹配？吸头的质量是否合格？装吸头是否上紧？移液器自身气密性是否良好？

移液器气密性检测方法：

简单目测法检测

1) 量程200μl以下的移液器，将吸头浸入液面1-2mm，静待20秒，观察吸头内部液面是否下降，如果下降了，就说明移液器出现了漏气的情况；

2) 1000μl以上的移液器，将吸头朝下悬垂20秒，观察是否有液体下滴，如果有，说明移液器也出现了漏气的情况。

专业压力泵检测

由供应商使用专业设备进行检测。

★ 如移液器本身密封性不好，需更换活塞或密封圈。

移液器校准

移液器校准的评判标准有准确性和重复性两项。准确性是指测定值与真实值(设定值)符合的程度，也就是测量值与真实值的差距大小。重复性是指单次测定值与平均值符合的程度。

1.具有资质的企业或机构对校准的量程和次数都有一定的要求。

2.对于使用者，我们可以用移液器吸取一定体积的去气双蒸水，在相应的电子天平上进行称量。但由于环境和场地的限制，一般只能进行粗略的自检。如需严格校准可由厂家进行校准。

3.不同规格的吸头上，会有几圈刻度，代表不同的体积，可以此作为移液是否准确的粗略判断。