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移液器的使用维护和校准(转)

发表时间: 2019-08-15 16:02:10

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移液器

构造和原理

移液器的工作是利用空气置换原理来实现的。活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液与排液。设定好量程后,推动活塞,排出部分空气,利用活塞拉力及大气压吸入液体,再由活塞推力排出液体。所以移液器的气密性好坏格外重要。


>>>> 影响移液准确性和精确性的因素主要有以下3点:

1

吸头:1. 吸头的质量吸头的做工和材质,可影响吸头内壁的液体残留和移液准确性。目前,国产的吸头虽然价格低,但质量上尚未达到国际水准,因此推荐使用进口的吸头);2.吸头与移液器的匹配度吸头与移液器的匹配度影响了吸头与移液器之间的气密性,因此选择适配的吸头与移液器非常重要。推荐使用同一厂家的移液器与吸头,保证其匹配度

2

移液器:移液器通过空气置换原理进行移液,其密封性、弹簧的弹性形变是影响移液的关键因素。因此平时使用移液器时,必须要正确操作、定期维护,才能保证移液器的准确。

3

操作者:最关键的其实就是操作者本身。养成正确的操作规范,可提高移液的准确性、大大减少移液产生的误差,保证实验结果。


一次移液操作,可分解为装吸头、量程设定、润洗吸头、吸液、排液和吹液、以及退吸头六个步骤

一次移液操作

第一步:装吸头

第二步:量程设定
1

移液器量程的设定原则:由大到小!

1)    由大量程向小量程调节时:如从600μl调节至400μl,直接调节;

2)    由小量程向大量程调节时:先朝所需量程方向连贯旋转,旋转到达超过所需量程1/3圈处,回调到所需量程处。如从20μl调节至50μl,先调节至60μl,再回旋至50μl。

   注:这是因为由小量程向大量程调节时,弹簧的弹性形变在短时间内无法完全回复,需有一个恢复阶段,可以想象一下刚从沙发上起身时,沙发垫恢复原状也是需要一定时间的。

 Ø  正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性!

2

量程范围的选择

选择量程时,需要注意,一般在 10%-100% 量程范围内可以操作,但在 10% 量程操作需要较高的操作技巧。因此建议的最佳量程是35%-100% 量程范围。在此量程范围,对操作技巧依赖更少,并保证移液的准确性和精度。从表中可以看出,当选择的量程范围越小,移液的准确性和重复性就会越差。

Ø  选择合适的吸头量程,可提高1%移液准确性!

第三步:润洗吸头

用同一样品对吸头进行润洗。先吸取样品,然后排回样品池或废液槽。充分吸液排液2-3次。

润洗的作用:

  1. 1.   在吸头内形成同质膜,降低吸头对样品的吸附;
  2. 2.   有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性。

注意:对于高温/低温样品,由于热胀冷缩带来更大的误差,不建议润洗。

Ø  润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!

第四步:吸液

此步影响移液准确性的因素主要有以下4点:

1

吸头浸入角度:建议尽量保持垂直,倾斜角度不大于15°

Ø  正确的移液角度,可提高2.5%移液准确性!

2

吸头的浸入深度10μl以下的吸头,浸入深度为1-2mm10-200μl的吸头,浸入深度为2-3mm200-2000μl的吸头,浸入深度为3-6mm2000μl以上的吸头,浸入深度为6-10mm

Ø  以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%)

3

吸头浸入时间:吸液后保持吸头浸入液面最少1,然后将吸头平缓移开液面。对吸取大容量样品或者高粘度样品尤为重要。

4

吸液速度:吸液通常采用一档吸液、二挡排液,在吸液时保持平顺,缓慢松开活塞,控制好吸液速度。过快的吸液速度,会导致形成气柱,使移液不准确;样品液进入套柄,对活塞和密封圈造成损伤;带入气雾,造成样品交叉污染。

Ø  不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降!

第五步:排液和吹液

先将排液按钮按至第一档(排液档),略作停顿以后,再按至第二档(吹液档)。

常规排液操作:

1. 沿内壁排液(常规)

2. 直接排入液面下:直接排入液面排液时要保持活塞下压再离开液面,否则容易导致倒吸!

3.   在液面上方排液

Ø  正确的排液技术提高1%的移液准确性!

操作一致性

保持一致的移液节奏,使活塞下压的速度和平稳一致。为了达到最好的操作一致性,可选择使用电动移液器,减少人为操作的影响

Ø  操作的一致性可提高1%的移液准确性!

★ 窍门:反向移液模式

适用于高粘度、挥发性的样品,如甘油、乙醇等,提高移液的准确性。同常规移液操作相反的流程,即二挡吸液、一档排液。

移液小结

误差大小

误差范围 %

技术操作

1.0%- 5.0%

吸头浸入深度/角度不正确(特别注意微量程移液器)

错误的吸液速度

0.5% -1.0%

选择合适的量程

吸头浸入深度

吸液速度

排液技术

一致性

小于 0.5%

量程设定 (已选合适量程)

吸头浸入角度

润洗

手温影响 

维护和校准

10%的移液故障(漏液/明显不准)是显而易见的!但频繁使用带来的系统偏差、密封油脂的自然损耗和错误操作带来的损伤等等,都会对移液产生影响,因此对移液器的日常维护和校准是必不可少的。对于使用者,可以进行一些简单的验证和常规保养,专业的校准和预防性维护可交由供应商。

移液器的放置

1. 在实验间隙,将移液器放置于支架上有利于避免手温影响。

2. 当天用完应调回最大量程后,放置于移液器支架上。这一点在很多实验室都做不到。弹簧长期处于压缩状态,对于弹性形变会造成影响,从而导致移液结果不准。

移液器的日常清洁

外部清洁:日常清洁剂(肥皂液、洗洁精等)擦洗,然后用双蒸水擦净晾干即可。

内部清洁:

1. 下半部分拆卸下来;

2.  塑料部件(套柄等)采用与外部清洁一致的方式即可;

3. 活塞清洁可用双蒸水(或先用异丙醇冲洗再用双蒸水洗净),晾干即可。(一般活塞的清洁涉及到补充涂抹专用的密封油脂)

Ø  注意:移液器主体密封部分,大多是免维护的,不能轻易拆卸。

移液器密封性检查

绝大部分移液器不准是由于移液器漏气造成的。造成移液器漏气的原因:吸头是否匹配?吸头的质量是否合格? 装吸头是否上紧?移液器自身气密性是否良好?

移液器气密性检测方法:

1

简单目测法检测

   1) 量程200μl以下的移液器,将吸头浸入液面1-2mm,静待20秒,观察吸头内部液面是否下降,如果下降了,就说明移液器出现了漏气的情况;

   2) 1000μl以上的移液器,将吸头朝下悬垂20秒,观察是否有液体下滴,如果有,说明移液器也出现了漏气的情况。

2

专业压力泵检测

 由供应商使用专业设备进行检测。

★ 如移液器本身密封性不好,需更换活塞或密封圈。

移液器校准

移液器校准的评判标准有准确性和重复性两项。准确性是指测定值与真实值(设定值)符合的程度,也就是测量值与真实值的差距大小。重复性是指单次测定值与平均值符合的程度。

1.具有资质的企业或机构对校准的量程和次数都有一定的要求。

2.对于使用者,我们可以用移液器吸取一定体积的去气双蒸水,在相应的电子天平上进行称量。但由于环境和场地的限制,一般只能进行粗略的自检。如需严格校准可由厂家进行校准。

3.不同规格的吸头上,会有几圈刻度,代表不同的体积,可以此作为移液是否准确的粗略判断。


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